本检测系统阐述了氧化修饰程度分析这一关键技术领域。文章聚焦于蛋白质、脂质、核酸等生物大分子氧化损伤的评估,详细介绍了核心检测项目、广泛的检测范围、主流的技术方法以及所需的精密仪器设备。内容旨在为相关领域的研究人员和技术人员提供一份全面、结构化的技术参考指南。
核心优势
检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。
检测流程
检测项目
蛋白质羰基含量:检测蛋白质侧链被氧化生成的羰基衍生物,是蛋白质氧化损伤最普遍的标志物。
3-硝基酪氨酸:特异性检测酪氨酸残基被过氧亚硝基等活性氮物种硝基化修饰的程度。
二酪氨酸:检测两个酪氨酸残基在氧化应激下形成的共价交联产物,反映蛋白质氧化交联。
甲硫氨酸亚砜/砜:量化甲硫氨酸残基被氧化为亚砜或砜形式的比例,与氧化还原调控和功能丧失相关。
硫醇/二硫键状态:分析蛋白质中半胱氨酸残基的游离巯基与氧化形成的分子内或分子间二硫键的比例。
脂质过氧化终产物(如MDA、4-HNE):测量丙二醛、4-羟基壬烯醛等不饱和脂肪酸过氧化的稳定终末产物含量。
8-羟基脱氧鸟苷:检测DNA分子中鸟嘌呤碱基被羟基自由基攻击后形成的氧化加合物,是DNA氧化损伤的金标准。
8-羟基鸟苷:与8-OHdG类似,但用于评估RNA分子的氧化损伤程度。
晚期糖基化终末产物:分析蛋白质、脂质在氧化和糖基化共同作用下形成的复杂、稳定的修饰产物。
总抗氧化能力:评估样本整体抵抗氧化应激、清除自由基的综合能力,间接反映氧化与抗氧化平衡状态。
检测范围
血清/血浆样本:用于临床或动物实验研究,评估全身性、系统性氧化应激水平及生物标志物。
组织匀浆液:从特定器官或组织中提取,用于研究局部组织的氧化损伤与疾病的相关性。
细胞裂解液:来源于培养的细胞系或原代细胞,用于细胞水平氧化应激机制研究及药物筛选。
纯化蛋白质溶液:对单一蛋白质进行体外氧化处理或修饰分析,研究其结构-功能变化。
线粒体等细胞器:分离富集线粒体等产生活性氧的主要细胞器,直接评估其氧化损伤状态。
食品与油脂:检测食用油、加工食品等在储存和加工过程中的脂质氧化程度,评估酸败与货架期。
药品与保健品:监控活性成分的氧化稳定性,确保药品效价和保健品质量。
化妆品原料:评估油脂、活性成分等是否因氧化而变质,影响产品安全性与功效。
环境污染物:分析大气颗粒物、工业废水等环境样本诱导生物体系产生氧化损伤的潜力。
生物材料与植入物:评估高分子材料等在体内环境下的氧化老化程度及其生物相容性。
检测方法
分光光度法:基于显色反应(如DNPH法测蛋白羰基),利用紫外-可见光吸收度进行定量,操作简便。
酶联免疫吸附法:利用特异性抗体对特定氧化修饰表位(如3-NT、8-OHdG)进行高灵敏度、高通量的定量检测。
高效液相色谱法:分离复杂样本中的氧化修饰产物,常与紫外、荧光或电化学检测器联用进行准确定量。
气相色谱-质谱联用法:特别适用于挥发性或衍生化后的脂质过氧化终产物(如MDA、乙烷、戊烷)的定性与精确定量。
液相色谱-质谱联用法:当前最强大的分析方法,可对蛋白质、核酸等的多种氧化修饰进行高分辨率、高灵敏度的鉴定与定量。
荧光光谱法:利用某些氧化产物(如脂褐素)或与特定探针反应后产物的荧光特性进行检测,灵敏度高。
电子顺磁共振波谱法:直接检测和鉴定样本中存在的自由基种类及其相对浓度,是研究自由基产生的直接手段。
电化学检测法:基于某些氧化修饰产物的电化学活性,用于快速检测DNA损伤(如8-OHdG)或抗氧化能力。
蛋白质印迹法:利用特异性抗体对蛋白质样品中的特定氧化修饰进行半定量分析和分子量鉴定。
组学分析技术:包括氧化蛋白质组学、脂质组学等,系统性、大规模地鉴定和定量生物样本中所有的氧化修饰。
检测仪器设备
紫外-可见分光光度计:用于基于吸光度变化的比色法检测,如测定总抗氧化能力、蛋白羰基含量等。
酶标仪:高通量读取ELISA板孔或基于微孔板的荧光、化学发光、吸光度信号,是免疫学检测的核心设备。
高效液相色谱仪:配备不同检测器,用于分离和定量各类氧化代谢产物及修饰分子。
气相色谱-质谱联用仪:用于挥发性脂质过氧化标志物的高灵敏度、高特异性定性与定量分析。
液相色谱-质谱联用仪:特别是高分辨质谱,是进行复杂生物样本中氧化修饰组学分析的终极平台。
荧光分光光度计:用于测量样本的激发和发射光谱,定量具有天然荧光或经荧光探针标记的氧化产物。
电子顺磁共振波谱仪:直接探测和表征未成对电子,是研究自由基种类和动力学的专用高端仪器。
电化学工作站:配备各种电极,用于开发和应用基于电化学传感器的氧化损伤标志物检测方法。
蛋白质印迹系统:包括电泳、转膜、成像等模块,用于对特定氧化修饰蛋白进行半定量免疫分析。
组织匀浆器/细胞破碎仪
