本检测系统阐述了β葡聚糖抗原检测这一重要的真菌感染诊断技术。文章详细介绍了该检测的核心项目、广泛的临床应用范围、主流及新兴的检测方法学原理,以及执行检测所需的关键仪器设备,旨在为临床及实验室人员提供全面的技术参考。
核心优势
检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。
检测流程
检测项目
血清(1,3)-β-D-葡聚糖浓度定量:核心检测项目,通过定量分析血液中BG的浓度,辅助诊断侵袭性真菌感染。
脑脊液BG检测:适用于疑似中枢神经系统真菌感染的患者,如真菌性脑膜炎,进行脑脊液标本的直接检测。
肺泡灌洗液BG检测:用于肺部侵袭性真菌病(如肺孢子菌肺炎、侵袭性曲霉菌病)的辅助诊断,提高呼吸道局部感染的检出率。
腹水/胸腔积液BG检测:对疑似真菌性腹膜炎或胸腔感染的患者,检测其体腔积液中的BG水平。
动态监测:对高危患者进行系列采样,通过BG浓度的动态变化评估抗真菌治疗效果及感染进程。
假阳性排查项目:结合血培养、细菌内毒素检测、影像学检查等,鉴别因血液透析、输注免疫球蛋白、使用某些纱布等导致的假阳性结果。
假阴性分析项目:结合患者免疫状态、感染菌种(如接合菌、隐球菌BG含量低)及抗真菌药物使用情况,分析检测结果阴性的可能原因。
定标品检测:使用已知浓度的标准品进行检测,以绘制标准曲线,确保定量检测的准确性和线性范围。
质控品检测:每日或每批次检测时,同时检测阴性质控品和阳性质控品,监控检测系统的稳定性和可靠性。
方法学比对:当实验室引入新检测系统时,需与原有方法或参考方法进行平行比对,验证其一致性。
检测范围
侵袭性念珠菌病:适用于由念珠菌属引起的血流感染、深部器官感染等的辅助诊断。
侵袭性曲霉菌病:对由曲霉属真菌引起的肺部、鼻窦等侵袭性感染具有重要的早期诊断价值。
肺孢子菌肺炎:是诊断耶氏肺孢子菌肺炎的关键非侵入性生物标志物,尤其适用于HIV感染者及非HIV免疫抑制患者。
镰刀菌病:可用于监测由镰刀菌引起的播散性感染。
组织胞浆菌病(部分):部分菌株的细胞壁含有BG,因此该检测可能对某些组织胞浆菌感染有提示作用。
发热伴中性粒细胞减少症患者:对长期中性粒细胞缺乏并伴有不明原因发热的患者,进行IFI的早期筛查。
器官移植受者:肝、肾、骨髓等实体器官或造血干细胞移植术后患者,是真菌感染高危人群,需常规监测。
重症监护病房患者:长期入住ICU、接受广谱抗生素治疗、有创操作多的患者是重点监测对象。
血液系统恶性肿瘤患者:接受化疗或免疫抑制治疗的血液病患者,其IFI风险显著增高。
自身免疫病患者:长期使用糖皮质激素或生物制剂治疗的类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等患者。
检测方法
G试验(动态显色法):主流方法,基于鲎试剂中G因子被BG激活进而触发显色反应的原理,通过光度计测量吸光度变化进行定量。
酶联免疫吸附试验:采用抗BG特异性抗体包被微孔板,通过酶标二抗和底物显色系统检测样本中BG含量。
化学发光免疫分析法:将免疫反应与化学发光技术结合,具有灵敏度高、线性范围宽、自动化程度高的优点。
侧向流免疫层析法:基于抗原-抗体结合及胶体金标记的快速定性或半定量检测方法,操作简便快捷,适用于床旁或基层筛查。
凝集法:早期方法,通过观察BG与特定试剂(如酵母聚糖)引起的凝集反应进行判断,现已较少用于临床定量。
比浊法:通过测量BG与试剂反应后溶液浊度的变化来定量,是另一种基于鲎试剂原理的检测手段。
多重PCR联用技术:并非直接检测BG,但可与BG检测联用,对阳性样本进行真菌种属的分子鉴定。
质谱联用技术:如液相色谱-质谱联用技术,用于BG的精确结构分析和绝对定量,多用于研究而非常规临床检测。
自动化仪器分析法:将动态显色法或化学发光法整合于全自动分析仪中,实现样本前处理、加样、孵育、检测和结果分析的全流程自动化。
手动微板法:在96孔板中手动完成试剂添加、孵育和读数,适用于样本量较小的实验室或研究用途。
检测仪器设备
全自动微生物动态检测系统:如Wako β-Glucan Test配套的毒素测定仪,可实现样本的自动连续监测和结果计算。
p>酶标仪:用于ELISA法和手动微板法G试验的终点吸光度读取,是免疫学检测的核心设备。化学发光免疫分析仪:集成样本盘、试剂仓、温育系统、清洗系统和发光信号检测系统,用于全自动化学发光法BG检测。
分光光度计:用于动态显色法G试验中反应体系吸光度随时间变化的实时监测和数据采集。
恒温水浴箱:为鲎试剂与样本的反应提供精确且恒定的孵育温度(通常为37℃)。
微量移液器及无菌吸头:用于精确移取样本、试剂和标准品,规格需覆盖微升级到毫升级。
涡旋振荡器:用于充分混匀样本、试剂或复溶的冻干品,确保反应体系的均一性。
离心机:用于处理全血样本,分离血清或血浆;也可用于处理浑浊样本的预处理。
生物安全柜:所有样本处理操作均应在生物安全柜内进行,以保护操作人员并防止样本污染。
-80℃/ -20℃冰箱及4℃冷藏冰箱:分别用于长期储存试剂、质控品和短期保存待测样本及已复溶试剂。
