本检测系统阐述了蛋白质谱定量分析的核心技术体系。文章从检测项目、检测范围、检测方法与检测仪器设备四个维度展开,详细介绍了该技术所涵盖的具体分析目标、适用样本类型、主流定量策略以及关键仪器构成。内容旨在为读者提供一份关于蛋白质组学定量研究的全面技术参考。

核心优势

检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。

检测流程

1 需求沟通
2 方案定制
3 取样/送检
4 实验检测
5 数据分析
6 出具报告

检测项目

蛋白质相对定量:比较不同样品中同一蛋白质表达水平的相对变化,通常以倍数形式表示。

蛋白质绝对定量:测定样品中特定蛋白质的绝对摩尔浓度或拷贝数。

翻译后修饰定量:对蛋白质的磷酸化、乙酰化、泛素化等修饰位点进行定量分析。

差异表达蛋白质筛选:通过比较组间蛋白质丰度,鉴定表达水平存在显著差异的蛋白质。

蛋白质相互作用定量:在亲和纯化-质谱联用技术中,对互作蛋白的结合强度进行定量评估。

蛋白质组动力学分析:监测蛋白质合成、降解速率,或修饰动态变化过程的定量研究。

生物标志物发现与验证:从复杂生物样本中定量筛选并验证与疾病相关的候选标志蛋白。

通路与网络分析:基于定量数据,构建和量化受调控的生物学通路或分子网络。

蛋白质复合物化学计量测定:确定一个蛋白质复合物中各组分之间的精确摩尔比例。

药物靶点占有率分析:定量评估药物分子与靶标蛋白的结合程度,用于药效动力学研究。

检测范围

细胞与组织裂解液:来源于培养细胞、动物或人体组织的全蛋白提取物,是最常见的样本类型。

血清与血浆:重要的临床样本,用于寻找疾病诊断或预后的循环蛋白标志物。

尿液与脑脊液:无创或微创获取的体液样本,适用于特定器官或系统的疾病研究。

外泌体与微囊泡:对细胞分泌的纳米级囊泡及其携带的蛋白质货物进行定量分析。

福尔马林固定石蜡包埋组织:对临床存档的FFPE样本进行回溯性蛋白质组定量研究。

植物与微生物样本:应用于农作物科学、植物生理及病原微生物的蛋白质组定量。

亚细胞组分:如线粒体、细胞核、膜蛋白等特定细胞器的蛋白质组定量分析。

抗体与重组蛋白:对生物制药中的蛋白药物进行纯度、修饰和杂质定量分析。

食品与农产品:用于食品过敏原检测、品质鉴定及转基因成分的蛋白质水平定量。

环境样本:对环境微生物群落进行宏蛋白质组学的定量研究。

检测方法

标记定量(TMT/iTRAQ):利用同位素或同量异位素化学标签在肽段水平标记多组样品,混合后同时上机分析。

无标记定量:基于质谱采集的肽段信号强度或谱图计数,直接比较不同样品中蛋白质的丰度。

目标蛋白质组学(PRM/SRM):针对预先选定的目标蛋白/肽段,使用高选择性、高灵敏度的质谱扫描模式进行精确定量。

数据依赖性采集:全扫描后自动选择强度最高的离子进行碎裂,是发现式蛋白质组定量的主流模式。

数据非依赖性采集:将质谱窗口内的所有离子同时碎裂,获得无偏、可重现的定量数据。

SILAC标记:通过稳定同位素标记的必需氨基酸在细胞培养过程中代谢掺入蛋白质,实现体内标记定量。

AQUA绝对定量: 使用合成的稳定同位素标记肽段作为内标,通过标准曲线对目标蛋白进行绝对定量。

SWATH-MS: 一种特定的DIA技术,将质谱全扫描范围划分为连续的小窗口进行循环采集。

SISCAPA-MRM: 结合特异性抗体富集目标肽段与MRM质谱检测,极大提高检测灵敏度和特异性。

Top-down蛋白质组学: 对完整蛋白质直接进行质谱分析和定量,保留完整的修饰信息。

检测仪器设备

液相色谱系统: 通常是纳升或微升流速的UHPLC系统,用于复杂肽段混合物的在线分离。

轨道阱质谱仪: 如Orbitrap系列,具有高分辨率、高质量精度和高灵敏度,是蛋白质组定量的核心设备。

四极杆-飞行时间质谱仪: 具备快速扫描和高分辨率特性,常用于DIA和DDA定量分析。

三重四极杆质谱仪: 主要用于靶向定量方法(如MRM/PRM),具有极高的定量重现性和灵敏度。

离子淌度质谱仪: 在传统LC-MS基础上增加离子淌度分离维度,提高定量的准确性和覆盖度。

纳升电喷雾离子源: 实现低流速色谱与质谱的高效接口,是提高检测灵敏度的关键部件。

高性能服务器与工作站: 用于海量质谱原始数据的存储、处理和数据库搜索。

蛋白质组学信息学软件: 如MaxQuant, Proteome Discoverer, Skyline等,完成从原始数据到定量结果的生物信息学分析。

自动化样品处理工作站: 实现从样品裂解、还原烷基化、酶解到除盐的全流程自动化,保证定量重复性。

高精度pH计与天平: 用于样品制备和缓冲液配制等关键步骤,确保实验基础条件的精确性。

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