本检测详细介绍了完整性电泳试验这一关键质量控制技术。文章系统阐述了该试验的核心检测项目、广泛的应用范围、标准化的检测方法以及所需的关键仪器设备,旨在为相关领域的科研人员与技术人员提供一份全面、实用的技术参考。
核心优势
检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。
检测流程
检测项目
基因组DNA完整性:评估基因组DNA是否发生降解,是判断样本质量的基础指标。
RNA完整性指数:通过分析28S与18S rRNA条带的清晰度与比例,定量评估RNA的完整程度。
质粒DNA拓扑结构:区分超螺旋、开环和线性三种不同构象的质粒DNA。
蛋白质分子量估算:通过与已知分子量的标准品对比,估算目标蛋白质的近似分子量。
蛋白质纯度分析:检测目标蛋白样品中是否存在非特异性条带或杂质。
核酸样本降解程度:通过观察电泳条带的弥散或拖尾现象,判断核酸的降解情况。
PCR产物特异性与大小:验证PCR扩增产物是否为预期大小的单一特异性条带。
限制性酶切效率:通过酶切前后条带的变化,评估限制性内切酶的切割是否完全。
细胞凋亡DNA ladder:检测凋亡细胞基因组DNA是否出现特征性的梯状条带。
外泌体/囊泡完整性:通过特定染色评估外泌体等囊泡结构在电泳前的完整性状态。
检测范围
动植物组织样本:从各种动植物组织中提取的基因组DNA、总RNA或蛋白质。
培养细胞系:贴壁或悬浮培养的哺乳动物、昆虫、微生物细胞的核酸与蛋白样品。
血液与体液样本:包括全血、血清、血浆、唾液、尿液等来源的生物分子。
细菌与质粒:细菌基因组DNA、质粒DNA以及细菌表达的重组蛋白。
病毒颗粒与核酸:纯化的病毒颗粒、病毒基因组DNA或RNA。
PCR与qPCR产物:常规PCR、实时定量PCR、逆转录PCR等反应后的扩增子。
酶切与连接产物:经限制性内切酶消化或DNA连接酶处理后的DNA片段。
重组蛋白与抗体:原核或真核系统表达并纯化的重组蛋白、单克隆/多克隆抗体。
核酸提取试剂盒质检:对商业化或自配核酸提取试剂盒的产出质量进行验证。
二代测序文库构建:在构建测序文库过程中,对片段化、筛选、扩增等各步骤产物进行质检。
检测方法
琼脂糖凝胶电泳:最常用的核酸完整性检测方法,利用琼脂糖凝胶作为支持介质进行分离。
变性琼脂糖凝胶电泳:在凝胶中加入甲醛等变性剂,用于RNA完整性的准确分析。
聚丙烯酰胺凝胶电泳:分辨率高于琼脂糖凝胶,常用于小片段核酸和蛋白质的精细分离。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:在变性条件下分离蛋白质,根据分子量大小进行分离和完整性判断。
脉冲场凝胶电泳:用于分离超大片段DNA,可评估大片段基因组DNA的完整性。
毛细管电泳:自动化、高分辨率的电泳技术,可精确定量分析核酸片段大小与浓度。
琼脂糖凝胶成像分析:使用凝胶成像系统对染色后的凝胶进行拍照和软件分析,获取定量数据。
溴化乙锭染色法:经典的核酸荧光染色方法,通过嵌入DNA双链在紫外下显影。
SYBR系列染料染色法:安全性更高的核酸荧光染料,灵敏度高,可用于RNA或DNA。
考马斯亮蓝/银染法:蛋白质凝胶电泳后常用的染色方法,用于显示蛋白质条带并评估纯度。
检测仪器设备
水平电泳槽:进行常规琼脂糖凝胶电泳的核心装置,提供核酸分离的电场环境。
垂直电泳槽:主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳,特别是蛋白质SDS-PAGE分析。
电泳电源:为电泳过程提供稳定电压、电流和功率的直流电源设备。
凝胶成像系统:集成紫外或白光透射光源、滤光片和CCD相机,用于捕获和分析凝胶图像。
紫外分析仪:早期用于观察EB染色的核酸凝胶的仪器,现多被凝胶成像系统取代。
微波炉或加热板:用于快速加热融化琼脂糖粉末,配制琼脂糖凝胶。
制胶器与梳子
毛细管电泳仪
化学发光成像仪
分光光度计/微量核酸蛋白测定仪
