本检测详细介绍了分子量分布凝胶电泳分析这一核心技术。文章系统阐述了该技术的核心检测项目、广泛的检测范围、标准化的检测方法以及关键的仪器设备构成。通过四个主要部分,为读者提供了从原理到实践的全面指南,适用于生物化学、分子生物学及高分子材料等领域的研究与质量控制。
核心优势
检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。
检测流程
检测项目
蛋白质分子量测定:通过标准品对比,精确测定目标蛋白质的表观分子量。
多肽片段分析:评估蛋白质水解或酶切后产生的多肽片段的分子量分布情况。
核酸片段大小确定:用于分析DNA或RNA片段(如PCR产物、酶切片段)的长度。
抗体纯度与完整性评估:检测抗体样品中完整IgG、轻链、重链或聚合体的存在与比例。
蛋白质聚合体分析:识别和量化样品中二聚体、多聚体等高分子量聚合形式。
蛋白质降解产物检测:监测蛋白质样品在储存或处理过程中产生的降解条带。
样品纯度鉴定:通过条带数量与强度评估目标生物大分子的纯度。
翻译后修饰初步判断:基于分子量偏移,初步推断磷酸化、糖基化等修饰的存在。
复合物组分分析:在非变性条件下,分析蛋白质-核酸或蛋白质-蛋白质复合物的组成。
工艺杂质监控:在生物制药工艺中,监控宿主细胞蛋白残留等杂质。
检测范围
小分子多肽:可分析分子量低至约1 kDa的多肽片段。
标准蛋白质:覆盖范围通常为10 kDa至250 kDa的球状蛋白质。
高分子量蛋白质:特殊凝胶可分析高达500 kDa甚至更大的蛋白质复合物。
DNA限制性片段:分析范围从数十bp到数万bp的DNA片段。
RNA样品:用于评估总RNA完整性或特定mRNA的分子量。
重组蛋白药物:对单克隆抗体、细胞因子等生物药的纯度与分子量进行质控。
病毒蛋白与颗粒:分析病毒外壳蛋白或小型病毒颗粒的组成。
脂蛋白复合物:在非变性凝胶中分析脂质-蛋白质复合物的分布。
合成聚合物:应用于高分子材料领域,分析合成多聚物的分子量分布。
酶反应产物:监测酶促反应(如限制性内切酶消化)产生的产物大小。
检测方法
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:最常用的方法,蛋白质与SDS结合后按分子量大小分离。
Native-PAGE(非变性电泳):保持蛋白质天然电荷与构象,按电荷-大小比分离。
Tris-甘氨酸系统:经典的SDS-PAGE缓冲系统,适用于大多数蛋白质分离。
Tris-硼酸/ Tricine系统:适用于低分子量多肽(小于10 kDa)的高分辨率分离。
梯度凝胶电泳:使用丙烯酰胺浓度梯度凝胶,扩大分离范围并提高分辨率。
琼脂糖凝胶电泳:主要用于大分子核酸片段的分离,操作简便快速。
双向电泳:第一向基于等电点,第二向基于分子量,用于复杂样品分析。
Western Blotting(免疫印迹):电泳后转移至膜上,用特异性抗体检测目标蛋白。
考马斯亮蓝染色:通用型蛋白质染色方法,灵敏度适中,操作简单。
银染与荧光染色:高灵敏度染色方法,可检测纳克级蛋白或特定结构的核酸。
检测仪器设备
垂直板电泳槽:用于SDS-PAGE和Native-PAGE的核心装置,提供稳定电场。
水平电泳槽:主要用于琼脂糖凝胶电泳,常用于核酸分析。
高压电源:提供稳定直流电压和电流,驱动带电分子在凝胶中迁移。
凝胶成像系统:配备CCD相机的暗箱,用于拍摄和记录染色后的凝胶图像。
化学发光成像仪:高灵敏度成像设备,专门用于检测Western Blot的化学发光信号。
凝胶灌制模具与梳子:用于制备均一厚度和整齐上样孔的聚丙烯酰胺凝胶。
转移电泳装置:用于将凝胶中分离的蛋白或核酸转印至硝酸纤维素膜或PVDF膜上。
扫描光密度仪
微量进样器
