本检测详细阐述了凝集素酶多指标检测技术,这是一种结合凝集素特异性糖结合能力与酶联放大信号的高通量、高灵敏度分析方法。文章系统介绍了该技术的核心检测项目、广泛的应用范围、关键的技术方法以及所需的主要仪器设备,为相关领域的研究与应用提供全面的技术参考。
核心优势
检测中心实验室配备国内外的前沿分析检测设备,检测报告获得CNAS、CMA双重认证,国际互认。
检测流程
检测项目
核心凝集素结合谱:通过一组特征性凝集素,系统检测样本中总蛋白或特定糖蛋白的复杂糖链结构结合情况。
岩藻糖基化水平:利用UEA-I、LCA等凝集素,特异性检测核心岩藻糖或末端岩藻糖修饰的水平,与炎症及癌症相关。
唾液酸化水平:使用SNA、MAL-II等凝集素,区分α-2,6和α-2,3连接的唾液酸,对肿瘤标志物研究至关重要。
平分型GlcNAc:应用PHAL凝集素,检测N-糖链核心区特有的平分型N-乙酰葡糖胺修饰。
β-半乳糖苷暴露:通过RCA120等凝集素,评估末端β-半乳糖的表达水平,反映糖基化加工状态。
O-GlcNAc修饰:利用特定凝集素或抗体组合,检测蛋白质丝/苏氨酸残基上的O-GlcNAc单糖修饰。
高甘露糖型糖链:应用Con A、GNA等凝集素,检测未完全加工的高甘露糖型N-糖链结构。
多天线复杂型糖链:通过PHA-L和PHA-E组合,区分复杂型N-糖链的双天线和四天线结构。
T/Tn抗原表达:使用PNA、VVL等凝集素,检测粘蛋白型O-糖链中异常截短的T和Tn抗原。
糖基化位点占有率:结合凝集素富集与质谱分析,定量特定蛋白质上糖基化位点的实际占用比例。
检测范围
血清/血浆样本:用于寻找疾病相关的糖蛋白生物标志物,如肝癌、炎症的糖组学分析。
组织裂解液与切片:对福尔马林固定石蜡包埋或冰冻组织进行糖组学原位分析,用于病理诊断。
细胞裂解液与活细胞:研究细胞表面糖谱动态变化、细胞分化、转化及信号传导过程。
外泌体与微囊泡:分析外泌体膜表面的特异性糖谱,作为液体活检和细胞通讯研究的新靶点。
单克隆抗体药物:全面评估治疗性抗体的糖基化一致性、关键糖型(如岩藻糖、半乳糖)含量。
重组蛋白药物:监控生产过程中重组蛋白的糖基化质量属性,确保产品效价和安全性。
植物多糖与糖蛋白:研究植物来源多糖的复杂结构以及植物糖蛋白的免疫原性。
微生物表面多糖:用于病原菌(如细菌、真菌)的血清分型、毒力因子及宿主互作研究。
食品与农产品:检测食品中过敏原糖蛋白、功能性多糖或评估农产品品质与成熟度。
法医学与物种鉴定:利用不同物种糖链结构的差异,进行血迹、体液等生物样本的种属鉴定。
检测方法
凝集素芯片技术:将多种凝集素点阵固定在固相载体上,实现一次实验对样本进行多指标糖谱扫描。
凝集素酶联免疫吸附法:将凝集素作为捕获或检测探针,结合酶标二抗或生物素-亲和素系统进行定量检测。
凝集素印迹法:将电泳分离后的蛋白质转膜,用辣根过氧化物酶标记的凝集素探测特定糖蛋白条带。
凝集素亲和层析:利用凝集素填料特异性富集带有特定糖结构的糖蛋白或糖肽,用于后续分析。
凝集素荧光细胞化学:使用荧光标记的凝集素对细胞或组织切片进行染色,在显微镜下观察糖链分布。
凝集素流式细胞术:用荧光凝集素标记活细胞或固定细胞,通过流式细胞仪快速分析细胞群体表面糖谱。
凝集素质谱联用技术:通过凝集素富集糖肽/糖蛋白,再经质谱鉴定,获得位点特异性糖型信息。
电化学凝集素传感器:将凝集素固定在电极表面,通过检测糖结合事件引起的电信号变化实现快速检测。
表面等离子体共振技术:实时、无标记地监测凝集素与流动样本中糖结构相互作用的动力学参数。
微流控凝集素分析:在芯片微通道内集成凝集素反应单元,实现微量样本的高通量、自动化糖分析。
检测仪器设备
多功能酶标仪:核心读数设备,用于测量ELISA、芯片等方法的吸光度、荧光或化学发光信号。
激光共聚焦扫描仪:用于高分辨率读取凝集素芯片的荧光信号,并进行图像分析和定量。
蛋白质印迹系统:包括电泳仪、转膜仪和化学发光成像仪,用于进行凝集素印迹实验。
高效液相色谱仪:与凝集素亲和柱联用,进行糖蛋白或糖肽的在线富集与分离。
质谱仪:尤其是液相色谱-串联质谱系统,用于鉴定经凝集素富集后的糖蛋白/糖肽的精确结构。
流式细胞仪:配备多激光器和荧光检测器,用于多色凝集素标记的细胞表面糖谱高通量分析。
荧光显微镜/倒置显微镜:配备特定荧光滤光片,用于观察细胞或组织切片的凝集素荧光染色结果。
表面等离子体共振仪:实时、无标记分析凝集素-糖相互作用的专用生物分子互作分析设备。
电化学工作站:用于构建和测试凝集素生物传感器,测量电流、阻抗等电化学参数的变化。
微流控芯片操控与分析系统:包括精密注射泵、芯片温控器及集成在芯片上的微型光学检测模块。
